人巨細(xì)胞病毒（HCMV）是皰疹病毒雙耳皰疹病毒亞科的一員，主要傳播途徑是來自對嬰兒呈HCMV血清陽性的母親母乳。早產(chǎn)兒以及極低出生體重的嬰兒，由于其免疫系統(tǒng)不成熟和缺乏來自母親的保護性抗體，可能會遭受HCMV感染的嚴(yán)重后果。但母乳是嬰兒推薦的營養(yǎng)來源，它也被認(rèn)為是對早產(chǎn)兒的治療方法。為了防止早產(chǎn)兒母乳獲得性巨細(xì)胞病毒感染，確保VLBW嬰兒盡快獲得安全的母乳，一種快速、經(jīng)濟、簡單的方法在母乳中進行HCMV檢測對于預(yù)防獲得性HCMV感染是至關(guān)重要和必要的。

中國醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)學(xué)院的姚軍教授的課題組在《Frontiers in cellular and infection microbiology》期刊上發(fā)表文章《Rapid detection of human cytomegalovirus by multienzyme isothermal rapid amplification and lateral flow dipsticks》，影響因子4.6。研究采用多酶恒溫快速核酸擴增技術(shù)MIRA和側(cè)流色譜帶LFD相結(jié)合，構(gòu)建了一種有效的HCMV檢測技術(shù)。在37°C恒溫環(huán)境下，整個反應(yīng)可以在12分鐘內(nèi)完成，10分鐘后可以明顯觀察到LFD顯色結(jié)果，且該方法的檢測靈敏度達到50copies/μl。檢測母乳樣本，將MIRA-LFD方法和常規(guī)qPCR做對比，MIRA-LFD的準(zhǔn)確率為100%。

研究概述

課題組開發(fā)了一種快速、有效、經(jīng)濟的HCMV檢測方法可以預(yù)防早產(chǎn)兒獲得性巨細(xì)胞病毒感染。課題組將MIRA與LFD結(jié)合起來，創(chuàng)造了一種新的HCMV檢測方法，適用于家庭檢測。

將母乳樣本渦旋離心后，使用DNA快速釋放劑從母乳樣品中提取HCMV DNA。整個MIRA擴增反應(yīng)可以在37°C恒溫環(huán)境下經(jīng)過12分鐘完成。接著稀釋產(chǎn)物，用LFD條帶顯色，10 min后可觀察結(jié)果。

實驗中使用了安普未來生物的DNA恒溫快速擴增試劑盒（膠體金檢測條型）（產(chǎn)品貨號：WLB8203KIT）、DNA恒溫快速擴增試劑盒（基礎(chǔ)型）（產(chǎn)品貨號：WLB8201KIT）。

這種方法不需要精密的儀器或熟練的操作人員，可應(yīng)用于醫(yī)療資源有限的區(qū)域或家庭，以減少早產(chǎn)兒HCMV感染引起的嚴(yán)重疾病，也可以使得早產(chǎn)兒、低體重兒早日開始母乳喂養(yǎng)。

實驗結(jié)果

將HCMV質(zhì)粒DNA連續(xù)稀釋10倍，從5×10⁶copies/μl稀釋到5copies/μl，然后使用MIRA-LFD檢測樣本。條帶可以識別濃度低至50copies/μl的質(zhì)粒DNA。并且觀察到水和人類基因組模板沒有擴增片段。

上圖為使用MIRA-LFD檢測HCMV質(zhì)粒樣本。1：水模板；2：人類基因組模板；3：5×10⁶copies/μl模板；4：5×10⁵copies/μl模板；5：5×10⁴copies/μl模板；6：5×10³copies/μl模板；7：5×10²copies/μl模板；8：5×10¹copies/μl模板。9:5copies/μl模板。

課題組使用qPCR對質(zhì)粒一樣地進行了10倍連續(xù)稀釋的分析，從5×10⁶copies/μl到5copies/μl，檢測限為5×10³copies/μl。結(jié)果表明，MIRA-LFD對HCMV的檢測靈敏度高于qPCR。

上圖為用qPCR方法檢測HCMV質(zhì)粒樣本。1：5×10⁶copies/μl模板，2：5×10⁵copies/μl模板，3：5×10⁴copies/μl模板，4：5×10³copies/μl模板，5：5×10²copies/μl模板，6：5×10¹copies/μl模板，7：5copies/μl模板，8：水模板。